La electroforesis es una técnica que nos permite separar las moléculas según su carga eléctrica y tamaño, a través de una matriz porosa que separa los fragmentos de ADN. Se empleo por primera vez en el año 1937 por Tiselius y a lo largo de los años ha ido perfeccionándose, de modo que en la actualidad se ha vuelto casi imprescindible.
Fundamentos
La electroforesis se basa en la migración de las moléculas según su carga (- y +), las biomacromoléculas
(proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen
determinada carga eléctrica con grupos aniónicos
y catiónicos capaces de disociarse.
El sistema de electroforesis a emplear se decide en función de los objetivos que se desean lograr algunos de mas empleados son , gel uniforme y tampón homogéneo, y gel y tampón heterogéneo.
La velocidad con la que las moléculas migran va depender de su densidad, voltaje aplicado y porosidad del gel de electroforesis.
La separación electroforetica de proteínas casi siempre se realiza por electroforesis en gel de poliacrilamia (PAGE), donde las proteínas son impulsadas a través de una matriz gelatinosa.
Esta matriz está compuesta de pequeño polímeros de una molécula orgánica ( acrilamida) la cual establece enlaces cruzados formando un tamiz o red.
El gel de poliacrilamida puede formarse como una losa delgada entre dos placas de vidrio.
Una vez que el gel se polimeriza, se suspende entre dos comportamientos los cuales contienen un amortiguador en el que se sumergen electrodos opuestos.
En los geles que tiene forma de losa, la muestra que contiene la proteínas de nuestro interés son colocadas en ranuras sobre el borde superior del gel.
Posteriormente se aplica el voltaje y la corriente fluye por la losa de gel lo que hace que las proteínas se muevan hacia el electrodo de carga opuesta.
Después de la electroforesis, la losa se retira de las placas y se tiñe.
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Las muestras de proteína suelen disolverse en una solución de sacarosa cuya densidad impide que la muestra se mezcle con el amortiguador y luego se carga en los pozos con una pipeta fina (paso 1).
Después se aplica la corriente directa al ge, lo que ocasiona que las proteínas se muevan en la poliacrilamida en carriles paralelos, las proteínas se mueven como bandas inversamente proporcionales a su masa molecular. (paso 2)
una vez que la electroforesis se completa, el gel se retira del marco de vidrio y se tiñe en una charola (paso 3)
Bibliografía
El sistema de electroforesis a emplear se decide en función de los objetivos que se desean lograr algunos de mas empleados son , gel uniforme y tampón homogéneo, y gel y tampón heterogéneo.
La velocidad con la que las moléculas migran va depender de su densidad, voltaje aplicado y porosidad del gel de electroforesis.
La separación electroforetica de proteínas casi siempre se realiza por electroforesis en gel de poliacrilamia (PAGE), donde las proteínas son impulsadas a través de una matriz gelatinosa.
Esta matriz está compuesta de pequeño polímeros de una molécula orgánica ( acrilamida) la cual establece enlaces cruzados formando un tamiz o red.
El gel de poliacrilamida puede formarse como una losa delgada entre dos placas de vidrio.
Una vez que el gel se polimeriza, se suspende entre dos comportamientos los cuales contienen un amortiguador en el que se sumergen electrodos opuestos.
En los geles que tiene forma de losa, la muestra que contiene la proteínas de nuestro interés son colocadas en ranuras sobre el borde superior del gel.
Posteriormente se aplica el voltaje y la corriente fluye por la losa de gel lo que hace que las proteínas se muevan hacia el electrodo de carga opuesta.
Después de la electroforesis, la losa se retira de las placas y se tiñe.
Las muestras de proteína suelen disolverse en una solución de sacarosa cuya densidad impide que la muestra se mezcle con el amortiguador y luego se carga en los pozos con una pipeta fina (paso 1).
Después se aplica la corriente directa al ge, lo que ocasiona que las proteínas se muevan en la poliacrilamida en carriles paralelos, las proteínas se mueven como bandas inversamente proporcionales a su masa molecular. (paso 2)
una vez que la electroforesis se completa, el gel se retira del marco de vidrio y se tiñe en una charola (paso 3)
Bibliografía
Hilda,
Dra, and Marilín García. 2000. “Electroforesis En Geles de Poliacrilamida :
Fundamentos , Actualidad e Importancia.” 1(2): 31–41.
Ill, S I S, and Morales
Becerril. “Fundamentos y Conceptos Básicos.
Da clic aquí para ver un vídeo relacionado con la electroforesis
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Hola creo un video ayudaría mucho a reafirmar la técnica de electroforesis, saludos.
ResponderEliminarGracias por la sugerencia salvador! agregare un video :)
EliminarHola, creo que tienes repetida esta publicación sería bueno que la eliminaras ya que abajo se ve la imagen muy grande y perdió claridad
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